氮素是植物重要的營養(yǎng)元素之一。傳統(tǒng)的氮素分析方法需要對葉片進行烘干消解處理，不但費時費力，還要使用大量對環(huán)境有污染的化學(xué)藥品，更重要的是難以對同一植株進行跟蹤檢測，在野外大田采樣測量也非常不方便。為了更加便捷準確地進行植物/作物氮素營養(yǎng)狀況評估，新型無損檢測技術(shù)無疑是必需的。

近日，Journal of Experimental Botany在線發(fā)表浙江大學(xué)題為“Optimal temporal-spatial fluorescence techniques for phenotyping nitrogen status in oilseed rape (Brassica napus L.)”的研究論文。

浙江大學(xué)的研究人員使用了三種熒光技術(shù)——OJIP快速葉綠素?zé)晒鈩恿W(xué)技術(shù)、脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒獬上窦夹g(shù)和多光譜熒光成像技術(shù)獲取了不同氮素處理下油菜不同生長時期以及不同葉位的熒光數(shù)據(jù)。通過對熒光信號數(shù)據(jù)的單因素方差分析和線性判別分析，闡明了不同氮素處理的油菜葉綠素?zé)晒庑盘栐诓煌L時期的垂直分布狀態(tài)，從而揭示氮素診斷葉位、時期與熒光信號獲取技術(shù)。本研究首先在室內(nèi)通過盆栽實驗展開相關(guān)研究，后進行了田間實驗的驗證，進而確保了結(jié)果的準確性與可重復(fù)性。

圖1. 左：典型樣品的RGB成像；右：實驗設(shè)計流程

 
葉片氮素與植物的光合能力和葉綠素含量密切相關(guān)。OJIP與脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)獲得的相關(guān)參數(shù)直接反映植物的光合能力與電子傳遞鏈的生理變化。多光譜熒光技術(shù)測量的紅色熒光RF和近紅外熒光IrF則直接反映了葉綠素含量，之前的相關(guān)研究已經(jīng)指出RF/IrF這一比率與葉綠素濃度成負相關(guān)。這就是使用這三種技術(shù)進行氮素檢測的理論基礎(chǔ)。

圖2. 左：相關(guān)葉綠素?zé)晒鈪?shù)；右：多光譜熒光RF/IrF成像圖

 
研究結(jié)果表明，在抽薹期，底層葉片的葉綠素?zé)晒鈪?shù)Fv/Fm（脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)）和PI_ABS（OJIP快速葉綠素?zé)晒鈩恿W(xué)技術(shù)）對油菜氮素狀況較為敏感，而頂葉的RF/IrF（多光譜熒光成像技術(shù)）在苗期早期敏感。在保證結(jié)果準確率的前提下，相比其他兩種技術(shù)，多光譜熒光成像技術(shù)有其*的優(yōu)勢。首先，多光譜熒光成像在葉片頂部的敏感度高且檢測的時間也早；其次，相較于其他葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)，多光譜熒光成像技術(shù)不需要暗適應(yīng)，因此更適合用于田間冠層尺度的檢測。綜上，本研究推斷出多光譜熒光成像技術(shù)在油菜氮素水平的田間早期診斷中擁有較高潛力。本研究可為氮素施肥管理決策和高產(chǎn)品種選育提供理論和技術(shù)支持。

    基于這三種技術(shù)，目前有可以進行成像測量和僅能進行點測量的兩類儀器。而對于類似研究來說，成像儀器無疑是具有巨大優(yōu)勢的。本研究中脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒獬上窈投喙庾V熒光成像分析都是使用的FluorCam開放式多光譜成像系統(tǒng)。這一系統(tǒng)是目前上*份可同時進行脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒獬上?、多光譜熒光成像和NDVI歸一化植被指數(shù)成像的儀器。而且其升級型號更可以增加OJIP快速葉綠素?zé)晒獬上窆δ?。由于OJIP快速葉綠素?zé)晒獬上窦夹g(shù)難度較大，F(xiàn)luorCam也是目前*份能進行這一成像分析的儀器。因為條件限制，本研究中OJIP測量則只能使用具備這一功能的手持式葉綠素?zé)晒鈨x進行葉片單點測量。

圖3. 左：FluorCam開放式多光譜成像系統(tǒng)；中：使用FluorCam系統(tǒng)進行的擬南芥OJIP快速葉綠素?zé)晒獬上穹治?；右：可同時進行OJIP與脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒鉁y量的FluorPen手持式葉綠素?zé)晒鈨x

 
浙江大學(xué)使用FluorCam系統(tǒng)已經(jīng)發(fā)表了近10篇SCI文獻。而在相關(guān)氮素營養(yǎng)研究中，Specim高光譜成像技術(shù)也是被廣泛應(yīng)用的。浙江大學(xué)之前就使用這一技術(shù)研究了胡椒總氮的空間分布。高光譜成像技術(shù)與熒光成像技術(shù)結(jié)合則可以進行更加全面的植物營養(yǎng)表型研究。

圖4. 左：Specim IQ智能高光譜成像儀；中：PhenoPlot輕便型光譜成像技術(shù)方案；右：浙江大學(xué)使用Specim技術(shù)進行的胡椒總氮空間分布研究

 
參考文獻：

• Sun D, et al. 2020. Optimal temporal–spatial fluorescence techniques for phenotyping nitrogen status in oilseed rape. Journal of Experimental Botany, doi:10.1093/jxb/eraa372
• Yu K Q, et al. 2014. Hyperspectral Imaging for Mapping of Total Nitrogen Spatial Distribution in Pepper Plant. PLoS ONE 9(12): e116205. doi:10.1371/journal.pone.0116205

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